تست غیر تهاجمی قبل از تولد (NIPT)
تست های بررسی شکست کروموزومی اسپرم ( تانل و SCSA )
با پیشرفت تکنیک ICSI نقش مهم اسپرم در تکامل و تکوین جنین مشخص شد. تحقیقات زیاد در این راستا منجر به استفاده از تست های عملکردی اسپرم و ارتباط نتایج آن ها با باروری شده است. وضعیت کروماتین اسپرم از جمله مباحثی است که بیشتر به آن پرداخته شده، زیرا اسپرم نه تنها در فعال سازی تخمک موثر است، بلکه نیمی از ژنوم نسل آینده توسط اسپرم منتقل می شود و سلامت آم جهت تکوین جنینی اهمیت بالایی دارد. در این میان بررسی سلامت اسپرم از اهمیت خاصی برخوردار است که نیمی از دلیل اهمیت آن می توان به موارد زیر اشاره کرد.
- وجود رابطه معکوس بین پارامتر های اسپرم و آسیب DNA
- افزایش آسیب DNA در افراد نابارور
- وجود رابطه معکوس بین میزان لقاح و آسیب DNA
- افزایش سقط در بیماری با آسیب DNA بالا
لذا، با توجه به اهمیت سلامت DNA اسپرم در باروری در این قسمت به روش های بررسی ساختار کروماتین پرداخته می شود.
تکنیک SCSA
اساس تکنیک SCSA وجود حساسیت ساختار کروماتین و DNA در هنگام مواجهه با اسید و ویژگی های متاکروماتیک آکریدین اورانژ است. این فلوروکروم به عنوان یک منومو بین دو زنجیره ی DNA قرار می گیرد و زمانی که DNA طبیعی است رنگ سبز و زمانی که فلوروکروم با تک رشته ای DNA ترکیب شود رنگ قرمز – نارنجی از خود ساطع می کند. اسپرم های رنگ گرفته توسط فلوسایتومتری مشخص می شوند. محققان در مطالعات بالینی بیشتر از این روش استفاده می کنند، با به کارگیری این روش می توان میزان موفقیت باروری را در فرد مشخص کرد.
تکنیک TUNEL
این روش در ابتدا برای تشخیص جمعیت اسپرم های دچار آپوپتوز در نمونه های انزالی به کار برده شده. در این روش شکست ها در یک یا دو رشته DNA قابل تشخیص است. در این روش نوکلئوتید های نشاندار شده، نوکلئوتید های انتهایی رشته DNA شکسته شده را مورد هدف قرار می دهند. این واکنش توسط یک پایانه ی ترانسفرازی کاتالیز می شوند که داکسی یوریدین تغییر یافته را با بیوتین یا Digoxigenin در پایانه ی OH3 از رشته ای که شکسته شده ، ترکیب می کند. سپس نوکلئوتید های تغییر یافته که متصل به فلورسنت می باشد نمایان می گردد. نوکلئوتید مستقیما با فلئوکروم نشاندار می شود. جهت تشخیص فلورسنت در اسپرم ها می توان از میکروسکوپ فلورسنت یا از دستگاه فلوسایتو متری استفاده کرد. رنگ فلورسنت مشاهده شده در هر اسپرم، مشانگر شکستگی در رشته یا رشته های DNA است.